Bir sıvı kromatografın beş ana sistemi aşağıdaki gibidir:
1. Enjeksiyon sistemi
Genellikle enjeksiyon işlemini tamamlamak için diyaframlı enjeksiyon örnekleyici veya yüksek basınçlı enjeksiyon odası kullanılır ve enjeksiyon hacmi sabittir.
Bu, analitik numunelerin tekrarlanabilirliğini geliştirmek açısından faydalıdır.
2. İnfüzyon sistemi
Sistem üç parçadan oluşuyor: yüksek basınç pompası, mobil faz deposu ve gradyan. Yüksek basınç pompasının genel basıncı 1,47~4,4X107Pa'dır ve akış hızı ayarlanabilir ve stabildir. Yüksek basınçlı mobil faz kromatografi kolonundan geçtiğinde numunenin kolondaki difüzyon etkisini azaltabilir ve kolondaki hareket hızını hızlandırabilir. Bu, çözünürlüğün iyileştirilmesi, numunenin geri kazanılması ve numunenin biyolojik aktivitesinin korunması açısından faydalıdır. Mobil faz depolama hataları ve gradyanlar, eluentin polaritesini, iyon gücünü, pH değerini değiştirmek veya diğer yöntemlere geçiş dahil olmak üzere, sabit fazın ve numunenin özelliklerine göre mobil fazı değiştirebilir.
3. Ayırma sistemi
Sistem kromatografi kolonlarını, bağlantı tüplerini ve termostatları içerir.
Kromatografik kolonun uzunluğu genellikle 10-50cm'dir (birlikte iki gerekiyorsa, ikisinin arasına bir bağlantı tüpü eklenebilir) ve iç çapı 2-5mm'dir. Yüksek kaliteli paslanmaz çelikten, kalın duvarlı cam tüpten, titanyum alaşımından ve diğer malzemelerden yapılmıştır. Sütun çapı 5-10 μ m olan parçacık boyutuna sahip (matris ve sabit sıvıdan oluşan) sabit bir fazla donatılmıştır; buradaki matris, yüksek mekanik mukavemetli reçine veya silika jelden oluşur; her ikisi de İnertlik (silika jel yüzeyindeki silikat genlerinin temel olarak uzaklaştırılması gibi), gözeneklilik ve geniş spesifik yüzey alanına sahip olma özelliklerine sahiptir. Ayrıca yüzeyi mekanik olarak kaplanmıştır (gaz kromatografisinde sabit fazların hazırlanmasına benzer) veya çeşitli genlerle (fosfat, dördüncül amin, hidroksimetil, fenil, amino veya çeşitli uzunluktaki karbon zincirlerine sahip alkil grupları gibi) veya ligandlarla kimyasal olarak bağlı olabilir.
Bu nedenle, farklı sabit bağıl yapılara sahip bu tür maddeler iyi bir seçiciliğe sahiptir. Örneğin, bezelye lektininin (PSA) gözenekli silika jelin yüzeyine bağlanmasıyla, fibroblastlardan bir glikoprotein izole edilebilir. Ek olarak, sabit faz plazmidi küçüktür ve sütun yatağının tekdüze ve yoğun bir duruma ulaşması kolaydır, bu da girdap akımı difüzyon etkisini büyük ölçüde azaltabilir. Matris küçük parçacık boyutuna ve sığ mikro gözeneklere sahiptir ve numunenin mikro gözenekli alanda kısa kütle aktarımı vardır. Bunlar bant genişliğini azaltmak ve çözünürlüğü artırmak için faydalıdır. Kolon verimliliği teorisi analizine göre, matris parçacık boyutu ne kadar küçük olursa tepsinin teorik N sayısı da o kadar büyük olur.
4. Algılama sistemi
Sıvı kromatografisi için yaygın olarak kullanılan üç dedektör vardır: UV dedektörü, diferansiyel kırılma indisi dedektörü ve floresans dedektörü
UV dedektörü
Bu dedektör, ultraviyole (veya görünür ışık) ışık için emme performansına sahip örneklerin algılanması için uygundur.
Özellikleri: geniş uygulama yelpazesi (proteinler, nükleik asitler, amino asitler, nükleotidler, peptitler, hormonlar vb. kullanılabilir); Yüksek hassasiyet (tespit sınırı 10-10g/mL); Geniş doğrusal aralık; Sıcaklık ve akış hızı değişikliklerine duyarlı değildir; Gradyan solüsyonu ile ayrıştırılan numuneleri tespit edebilir.
5. Veri işleme sistemi
Bu sistem test verilerini toplayabilir, saklayabilir, görüntüleyebilir, yazdırabilir ve işleyerek numunelerin uygun şekilde ayrılmasını, hazırlanmasını veya tanımlanmasını sağlar.
Özetle, sıvı kromatografisi bir numune sistemi, bir infüzyon sistemi, bir ayırma sistemi, bir tespit sistemi ve bir veri işleme sisteminden oluşur. Bu sistemlerin kombinasyonu deneyi daha güvenilir ve kararlı hale getirir.